日期:2023-07-27 點(diǎn)擊: 244 次
在PCR實(shí)驗(yàn)室的管理中應(yīng)盡量避免污染產(chǎn)生,如果不慎產(chǎn)生了污染也有對應(yīng)的處理方法,博泰小編帶大家了解關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室污染的處理方法及注意事項(xiàng)有哪些。
一、PCR實(shí)驗(yàn)室檢測被污染的方法
1、酶解酶可將長鏈的核酸分子降解成小片段。
2、高壓變性:高壓可以將核酸降解成20-30bp的小片段。
3、紫外照射:PCR產(chǎn)物中嘧啶堿基會形成二聚體,延伸終止。
4、修飾:標(biāo)記遺傳物質(zhì),阻止聚合酶與核酸的結(jié)合,從而抑制DNA擴(kuò)散。
5、酒精擦拭:將核酸沉淀,擦拭后保證污染表面污染得到一定程度的緩解。
二、PCR實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)
1、操作時設(shè)立陰陽性對照和空白對照,即可驗(yàn)證PCR反應(yīng)的可靠性,又可以協(xié)助判斷擴(kuò)增系統(tǒng)的可信性。
2、使用一次性吸頭,嚴(yán)禁與PCR產(chǎn)物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染。
3、避免反應(yīng)液飛濺,打開反應(yīng)管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應(yīng)立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面。
4、操作多份樣品時,制備反應(yīng)混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應(yīng)的精確度。
5、由于加樣器容易受產(chǎn)物氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染,最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有至少PCR操作過程中加樣器應(yīng)該專用,不能交叉使用,尤其是PCR產(chǎn)物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區(qū)。
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